Centro de Documentação da PJ
Monografia
 CD284 |
Alternative specimens in forensic toxicology [Documento electrónico] : analysis of drugs of abuse / Cláudia Isabel Reis Margalho.- Covilhã : [s.n.], 2017.- 1 CD-ROM ; 12 cm
Tese para obtenção do Grau de Doutor em Bioquímica, apresentada à Universidade da Beira Interior, tendo como orientadores Manuel Lopez-Rivadulla Lamas, Maria Eugenia Gallardo Alba, Francisco Corte Real Gonçalves. Ficheiro de 6,07 MB em formato PDF (139 p.). Resumo alargado inserto na publicação.
TOXICOLOGIA FORENSE, DROGA SINTÉTICA, QUÍMICA FORENSE, CROMATOGRAFIA, ESPECTROMETRIA, AUTÓPSIA, ANÁLISE DE DROGA, INSTITUTO DE MEDICINA LEGAL, TESE, PORTUGAL
A principal razão para o desenvolvimento do presente estudo residiu essencialmente no facto de que nele se reuniram duas áreas de crescente interesse no campo da toxicologia forense: as amostras alternativas postmortem e as novas substâncias psicoativas. Em primeiro lugar, é possível verificar que as matrizes alternativas têm tido um papel importante no campo de toxicologia forense ao longo da última década, principalmente devido às vantagens que apresentam quando usadas em complementaridade com o sangue e/ou urina ou em sua substituição, quando as suas colheitas são inviabilizadas por diversos fatores (carbonização, hemorragia extensa, politraumatizados, avançado estado putrefativo etc.). O recurso a diferentes matrizes biológicas postmortem, na condução de uma análise toxicológica, constitui um verdadeiro desafio para a toxicologia forense pois são necessárias metodologias suficientemente sensíveis para proceder ao isolamento dos diferentes analitos que eventualmente estejam presentes em baixas concentrações nas amostras a analisar. No entanto, entende-se que uma análise toxicológica conduzida em distintas matrizes biológicas permite uma interpretação mais completa do caso, já que cada uma delas poderá fornecer uma perspetiva particular sobre a anterior exposição a determinadas substâncias. Mais problemático, e não menos raros, são os casos em que a quantidade de sangue é insuficiente ou mesmo inexistente, para realizar a investigação pericial. Nestes casos, o humor vítreo (VH) e o líquido pericárdico (PF) poderão ser usados como alternativa viabilizando, deste modo, a realização da análise. Apesar de escassos, os estudos realizados em VH na determinação de anfetaminas e metanfetaminas e de novas substâncias psicoativas, demonstram que existe uma boa correlação entre a concentração das substâncias encontradas e as correspondentes no sangue. Esta situação poderá ser justificada pelo facto de o VH ser maioritariamente composto por água (99%), possuir um pH de 7.5 (semelhante ao do sangue) e não ter atividade metabólica significativa. A maior desvantagem desta matriz é o limitado volume de amostra (1 a 3 mL) que não permite uma análise extensiva a várias substâncias. No caso do líquido pericárdico, o volume de amostra acessível para análise é de 5 a 10 mL, no entanto esta matriz tem sido pouco estudada. Os poucos trabalhos existentes demonstram que esta matriz poderá ser uma útil alternativa ao sangue uma vez que apresenta uma boa correlação das concentrações das substâncias encontradas nestas amostras. A maior desvantagem que esta matriz apresenta é a possibilidade de ser contaminada por fenómenos de difusão postmortem, resultantes de uma elevada concentração das drogas eventualmente presentes no estômago. Uma vez que, em Portugal e por todo o mundo se tem assistido a uma nova tendência emergente em relação ao consumo das "novas substâncias psicoativas" (NSP) que se encontra associada a diversos perigos na saúde publica, afigurou-se relevante realizar este estudo. O presente trabalho foi direcionado para substancias pertencentes aos grupos mais representativos em termos de consumo e grau de toxicidade: catinonas, fenetilaminas e salvia divinorum. Em Portugal, esta realidade alastrou-se de forma discreta, sem receber a atenção devida por parte de todas as entidades competentes, estando estreitamente associada a abertura das lojas designadas por “smartshops”. Consequentemente, entre a abertura da primeira loja (que ocorreu em 2007) e 2013, foram registadas cerca de 40 lojas especializadas e dedicadas exclusivamente ao comércio destas NSP. Com a entrada em vigor do Decreto-lei no 54/2013 de 17 Abril de 2013, estes locais foram encerrados por motivo da proibição da venda destas substâncias. No entanto, a comercialização e consumo destas substancias não cessou o que é confirmado por estudos de monitorização da venda destas substancias no espaço europeu, promovidos pelo Observatório Europeu da Droga e da Toxicodependência (OEDT) e Europol. Novas substancias continuam em ascendente proliferação o que e indicador da existência de redes de larga escala de produção e distribuicao. Deste modo, este trabalho pretendeu contribuir para o desenvolvimento de metodologias analíticas para determinações quantitativas de varias destas novas substancias psicoativas em distintas matrizes biológicas tais como: sangue total, plasma, humor vítreo e liquido pericárdico. As substancias sobre as quais realizamos o nosso estudo foram: salvinorina a (principal componente ativo da planta Salvia divinorum); algumas catinonas como: metcatinona, PMA, mefedrona e metedrona; e algumas fenetilaminas tais como: catina, efedrina, DOM, DOB e as pertencentes a serie 2C-X: 2C-H, 2C-B, 2C-I, 2C-T-2, 2C-T-4 e 2C-T-7. Para a preparação de volumes de 250 uL de amostras de sangue, plasma e liquido pericárdico e de 100 uL de humor vítreo foi usada a extração em fase solida (SPE). Atualmente, a SPE é uma das técnicas mais usadas na extração e/ou concentração de amostras complexas, que viabiliza a deteção de compostos em concentrações reduzidas por técnicas cromatográficas especializadas, como a cromatografia de gases e a liquida acopladas a espectrometria de massa (GC-MS e LC-MS). Neste estudo, os extratos foram obtidos por GC-MS em modo SIM. Para habilitar a deteção e a separação das substâncias, por esta técnica cromatográfica, foi previamente aplicado um procedimento de derivatizacao através do uso de micro-ondas. Este procedimento, com duração de apenas 90 segundos, foi otimizado de forma a minimizar o consumo de tempo (superior a 30 minutos) que e geralmente despendido nas técnicas clássicas de derivatizacao para a analise de drogas de abuso. Tratando-se de uma técnica analítica pouco estudada na área da toxicologia forense, oferece-nos significativas vantagens em termos de rapidez na derivatização completa dos compostos. O método foi aplicado a todas as substâncias, com exceção da salvinorina a, tendo sido obtidos derivados trifluoroacetilados estáveis. Dado que a confiança na interpretação dos resultados analíticos é um pré-requisito em toxicologia forense e clínica, foi necessário garantir que os métodos desenvolvidos eram adequados para os fins pretendidos. Assim, as duas metodologias desenvolvidas foram validadas, em todas as matrizes biológicas estudadas de acordo com normas preconizadas internacionalmente para a validação de métodos bioanalíticos. No decurso da validação foram estudados os seguintes parâmetros analíticos: seletividade, intervalos de linearidade, fenómenos de arrastamento entre amostras de maior concentração para outras de concentração mais baixa, limites de deteção e de quantificação (LOD e LLOQ), precisão (intra-dia e intermédia) e exatidão, eficiência do processo extrativo e estabilidade (permanência dos extratos no amostrador em condições ambientais por 48 h, permanência das amostras na bancada de trabalho por períodos de 3h, ciclos de congelação e descongelação ao longo de 7 dias). Os métodos foram considerados seletivos para todos os compostos estudados e em todas as matrizes analisadas. Foi obtida linearidade dentro das gamas de trabalho estudadas (5-100 ng/mL para a salvinorina a e 5-600 ng/mL para as catinonas e fenetilaminas) com coeficientes de correlação superiores a 0.99. Os valores obtidos de recuperação variaram entre 77% (2C-T-4 a 20 ng/mL) e 113% (2C-H a 500 ng/mL) para cada composto analisado nas diferentes matrizes biológicas estudadas. Verificou-se que todos os resultados obtidos para os parâmetros de repetibilidade e precisão intermédia apresentaram valores de CV<20% e que a exatidão se situou dentro do intervalo de ±20% dos valores nominais, em todos os níveis de concentrações estudados. Os métodos apresentaram valores de LOD e LLOQ de 5 ng/mL para cada um dos compostos, em todas as matrizes biológicas. As amostras não processadas que permaneceram no laboratório à temperatura ambiente durante 3h (para todas as substâncias analisadas) e os extratos deixados no amostrador (nas condições a que se encontra o sistema de GC-MS) por períodos até 24 h (salvinorina a) e 48 h (catinonas e feniletilaminas) revelaram-se estáveis. Por último, não foi verificada degradação dos compostos após três ciclos de congelação e descongelação completa ao longo de sete dias. As metodologias desenvolvidas foram aplicadas a amostras resultantes de autópsias realizadas no serviço de Clínica e de Patologia Forenses e nos Gabinetes médico-legais pertencentes à delegação do centro do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. Estes procedimentos poderão ser uma ferramenta bastante útil em laboratórios de toxicologia forense. Até ao momento, estas substâncias não tinham sido simultaneamente estudadas em amostras postmortem de humor vítreo e líquido pericárdico. As metodologias validadas foram implementadas nas análises de rotina do serviço de Química e Toxicologia Forenses da delegação do centro do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P.